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Ingegneria di precisione per la resistenza al PRRSV nei suini

I macrofagi dei suini con il genoma modificato che manca del dominio SRCR5 nel gene CD163 sono totalmente resistenti ad entrambi i genotipi di PRRSV, mantenendo la funzione biologica...

15 Marzo 2017
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Il PRRSV presenta un tropismo di cellula ospite stretto, limitato alle cellule della linea monociti/macrofagi. Il CD163 è stato descritto come un recettore di fusione del PRRSV, in modo che la regione di questo recettore scavenger con dominio ricco in cisteina-5 (SRCR5) ha dimostrato di essere un sito di interazione per il virus in vitro. Il CD163 si esprime ad elevati livelli sulla superficie dei macrofagi, in particolare nel sistema respiratorio.

Qui viene descritta l'applicazione di CRISPR/Cas9 in zigoti suini che portano ad una generazione di suini con una delezione dell'exon 7 del gene CD163, codificando per SRCR5. La soppressione del SRCR5 non mostró effetti avversi nei suini mantenuti in condizioni di allevamento standard, osservando indici di crescita normali e la conta ematica completa.

I macrofagi alveolari polmonari (PAM-Pulmonary alveolar macrophages) ed i monociti del sangue periferico (CMSP-peripheral blood monocytes) isolati dai suini vennero valutati in vitro. Entrambi i macrofagi PAM ottenuti a partire da PBMCs con stimolazione CSF1 (PMMs) mostrarono la caratteristica differenziazione ed espressione del marcatore di superficie cellulare dei macrofagi delle rispettive origini. Venne confermata l'espressione e la plicatura appropriata della delezione SRCR5 di CD163 sulla superficie dei macrofagi e l'attività biologica della proteina come emoglobina-aptoglobina. L'infezione sperimentale dei PAMs e PMMs con il PRRSV del genotipo 1 subtipi 1, 2 e 3 e di PMMs con il genotipo 2, mostrarono completa resistenza alle infezioni virali valutato con la replicazione. La microscopia confocale mostró la mancanza di strutture di replicazione nei macrofagi di delezione SRCR5 CD163, il che indica l'inibizione dell'infezione difronte all'espressione genica.

Christine Burkard, Simon G. Lillico, Elizabeth Reid, Ben Jackson, Alan J. Mileham, Tahar Ait-Ali, C. Bruce A. Whitelaw, Alan L. Archibald. Precision engineering for PRRSV resistance in pigs: Macrophages from genome edited pigs lacking CD163 SRCR5 domain are fully resistant to both PRRSV genotypes while maintaining biological function. PLOS. February 23, 2017. http://dx.doi.org/10.1371/journal.ppat.1006206

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