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Dopo la convalida visiva, discussa nel precedente articolo di questa serie di articoli sulla biosicurezza nel trasporto di animali, continuiamo con la convalida microbiologica di questo processo.
Convalida microbiologica
È un sistema utilizzato per valutare la procedura di pulizia e disinfezione del trasporto, ma non per valutare le condizioni di un camion prima del carico poiché il problema principale è il tempo necessario per ottenere le informazioni (incubazione del campione e risultati in 48-72 ore) e il camion avrà sicuramente già effettuato il trasporto.
Nella validazione microbiologica, l'obiettivo principale è la rilevazione di enterobatteriacee (batteri Gram- che fanno parte del microbiota intestinale). Questi enterobatteri indicheranno la presenza o l'assenza di materia organica dopo la pulizia e la disinfezione del camion. Questo metodo viene utilizzato e non la PCR specifica per i patogeni suini (PRRS, PED, ecc.), poiché la PCR ci indicherà solo la presenza di materiale genetico, ma mai se l'agente patogeno è vitale ed in grado di infettare.
Per il controllo microbiologico del trasporto, è importante standardizzare il campionamento (sempre fatto allo stesso modo). Può essere fatto utilizzando tamponi o piastre RODAC®, ma a causa del volume della superficie che si trova in un rimorchio di camion, è meglio aumentare la superficie campionata utilizzando speciali salviette o spugne (Chiffonettes® / Sodi-box®) (foto 1). Normalmente vengono prelevati due campioni per piano del rimorchio, uno dall'ascensore, uno dalla cabina e un altro dai cassonetti laterali (foto 2). Ciò comporta da 7 a 9 campioni per camion (a seconda del numero di piani nel rimorchio). La stessa quantità di superficie (cm²) di ogni punto deve essere sempre campionata e questa superficie deve essere comunicata al laboratorio per darci i risultati in CFU / cm².
Valutazione dei risultati: non è stato scritto nulla su quale concentrazione di Enterobacteriaceae sarebbe corretta per determinare un trasporto "adatto" o "non adatto" per un carico di animali.. Tuttavia, ci sono riferimenti nell'industria alimentare: una superficie "adatta" è quella che presenta una carica da 0-10 entero-batteri/cm². Da questo punto di riferimento, ogni azienda deve determinare il proprio punto limite accettabile.
Rilevamento dell'Adenosina Trifosfato (ATP)
A causa della limitazione temporale delle colture microbiologiche per ottenere risultati, esistono altri strumenti sul mercato per la convalida della pulizia e della disinfezione, originari dell'industria alimentare, che possono essere utilizzati nel caso di trasporto di suini in forma combinata con la microbiologia. Uno di questi strumenti è il rilevamento di adenosina trifosfato (ATP). L'ATP è un componente presente in feci, residui organici, cibo, batteri, protozoi, parassiti, lieviti e funghi. Tuttavia, non serve per rilevare virus. Nell'industria alimentare, il rilevamento dell'ATP sulle superfici di lavoro viene utilizzato come controllo di qualità per la pulizia e la disinfezione. E' un test rapido (risultati in secondi), facile da usare per gli operatori, però bisogna usare cautela con l'interpretazione dei risultati, perché è un test molto sensibile. Il campionamento del camion per trasporto viene effettuato nei punti di controllo sopra menzionati (foto 2), ma con un tampone che contiene già un agente umettante e l'enzima luciferasi (attivato con la presenza di ATP). Una superficie di 10 cm x 10 cm viene campionata in ciascun punto di controllo. Usando un luminometro (foto 3), si legge la bioluminescenza del tampone e si ottengono risultati in RLUs (Relative Light Units, unità di luce relativa).
Valutazione dei risultati: Come per il test microbiologico, è necessario stabilire limiti critici per indicare quali valori possono essere considerati corretti. Nell'industria alimentare, questi valori possono variare in base alla superficie campionata e al prodotto che si produce. In uno studio condotto in Canada, l'efficacia del protocollo di pulizia e disinfezione del trasporto suino è stata valutata utilizzando il metodo di bioluminescenza ATP e sono stati stabiliti i seguenti valori critici: idoneo, inferiore a 430 RLU / 100 cm², con rischio di contaminazione tra 430 e 850 RLU / 100 cm² e con un rischio elevato valori superiori a 850 RLU / 100 cm² (questi valori sono solo a titolo di esempio).
Quando si valutano i risultati, è necessario prendere in considerazione la raccolta di campioni nell'impianto di lavaggio e dopo la pulizia e la disinfezione poiché, come detto in precedenza, è un metodo molto sensibile e la contaminazione ambientale può incrementare i valori positivi.
È necessario un investimento iniziale per il luminometro, ma il costo di ciascun campionamento non è elevato (circa 2 euro / tampone). Si consiglia di ricalibrare il dispositivo di lettura (è possibile utilizzare un campione con il tampone all'interno di una siringa sterile o una provetta "vacutainer®" sterile).
Il settore suinicolo è sempre più consapevole del fatto che devono esistere protocolli per le diverse procedure che svolgiamo negli allevamenti e nel trasporto di animali e che questi protocolli devono essere scritti. Tuttavia, a volte dimentichiamo il punto finale e più importante, la convalida del protocollo per sapere se funziona davvero (o in altre parole, il controllo di qualità)...
